高压灭菌器孢子测试要求：医疗保健和实验室环境综合指南

高压灭菌孢子测试的范围和目的

高压灭菌孢子测试（生物指示剂测试）验证蒸汽灭菌循环可以在实际操作条件下杀死高度耐药的孢子（通常是嗜热脂肪地芽孢杆菌）。在医疗保健和实验室环境中，孢子测试补充了物理监测器和化学指标，以确认无菌保证水平 (SAL) 并满足监管和认证要求。

本指南重点关注实用的、可实施的要求：测试频率、使用哪些指标、经过验证的工作流程、验收标准、文档以及发生故障时的故障排除。

监管和标准格局

要求因行业和司法管辖区而异，但常见参考点包括 ISO 11138（生物指标）、ISO 17665（湿热灭菌验证）、AAMI ST79（医疗蒸汽灭菌）、CDC/HICPAC 指南、CMS 和联合委员会对医疗机构的期望，以及研究和生物制药实验室的 GLP/GMP 实践。工厂应使内部 SOP 与这些框架和当地法规保持一致。

• 医疗保健：遵循 AAMI ST79 和适用的认证要求；维护日常 BI 测试并记录纠正措施。
• 临床实验室和研究：符合 ISO/GMP/GLP 期望和机构生物安全政策；强调验证和例行验证。
• 制药和设备制造商：将 BI 使用与性能鉴定 (PQ) 以及根据质量体系法规进行的持续重新鉴定相结合。

最低测试频率和触发因素

频率应确保持续的无菌保证而不中断操作。以下实用时间表平衡了风险和监管期望。

• 常规 BI 测试：医疗保健中的每台蒸汽灭菌器至少每周进行一次；风险较高的设施可能每天都会运行。
• 维护或维修后：在将灭菌器返回使用之前执行 BI 测试。
• 搬迁、安装或重大公用设施变更后：进行安装鉴定 (IQ)、操作鉴定 (OQ) 和基于 BI 的 PQ。
• 循环更改：负载配置、循环参数或包装的任何更改都需要 BI 重新验证。
• 基于事件的触发：任何失败的化学指示剂、可疑的 Bowie-Dick 测试、异常的物理打印输出或湿负载后的 BI 测试。

选择生物指示剂

选择专为湿热灭菌而设计、具有可追溯批次认证和适当耐受特性的 BI。目标是用已知的标准化微生物负荷挑战循环。

• 微生物：用于蒸汽循环的嗜热脂肪地芽孢杆菌孢子（通常为 121–134°C）。
• 格式：供实际临床使用的独立 BI（带有生长培养基的安瓿/小瓶）；用于实验室验证研究的剥离 BI。
• 电阻：确认相关温度（例如 D121°C）下的 D 值和制造商证书中的 z 值。
• 批次可追溯性：保留包含数量、D 值、有效期、储存条件的分析证书 (COA)。
• 读出时间：快速读取BI（1-3小时）支持更快发布；标准孵化（24-48 小时）对于常规监测仍然可以接受。

放置和负载配置

BI 放置必须挑战最难消毒的位置。放置不当可能会掩盖周期的不足，导致错误的信心。

• 最坏情况区域：仪器内部深处、密集的纺织品包装、包裹的容器或管腔；负载的中心质量而不是边缘。
• 代表性负载：测试常规处理的最重、最密集或最复杂的配置。
• 多个BI：至少使用一个BI；考虑使用大型室或混合负载的附加装置来对多个冷点进行采样。
• 积分化学指示剂：将 5 类化学积分仪与 BI 配对，在培养结果孵化时提供即时视觉反馈。

验证的测试工作流程

循环前检查

验证水质、腔室清洁度、包装完整性以及之前是否通过了 Bowie-Dick 测试（针对预真空灭菌器）。确认负载适合蒸汽灭菌，并且器械已清洁和干燥。

BI 准备和部署

记录 BI 批次和有效期。将 BI 放置在负载最困难的部分内（例如，包装好的托盘内、纺织品包装的中心或内腔模拟器内）。包括未灭菌的对照 BI，用于孵化比较。

使用适当的参数运行循环

根据制造商 IFU 和设施 SOP，使用经过验证的循环（例如，对于包装好的仪器，在 132–134°C 下持续 4 分钟，对于某些负载，在 121°C 下持续 30 分钟）。确保干燥完成以避免湿包。

孵化和读数

根据 BI IFU 孵育已处理的 BI 和未处理的对照。对于快速读取 BI，请遵循指定的荧光或颜色变化方案。处理后的 BI 中的负生长结果与正对照生长一起表明通过了测试。

文档和发布

记录循环参数（时间、温度、压力）、BI 详细信息、放置和结果。在医疗保健无菌处理中，在确认可接受的 BI 结果之前，不要释放关键负载供患者使用，除非允许风险管理、记录的例外情况。

验收标准和解释

通过的结果要求处理后的 BI 显示没有增长，而未处理的对照显示增长。化学指标应达到终点，物理监测仪必须反映正确的循环参数。

• 通过：处理BI阴性，对照BI阳性；物理记录在容许范围内；化学指标合格。
• 失败：任何已处理的 BI 显示增长或控件无法增长；视为灭菌失败并采取纠正措施。
• 模棱两可：读数不一致（例如，边界荧光）；使用新的 BI 重复并保持受影响的负载直至解决。

BI 故障的纠正措施

BI 失败表明潜在的杀伤力不足。在恢复日常运营之前，进行结构化调查、遏制和重新测试。

• 隔离：保留并召回自上次已知通过 BI 以来的所有货物；防止患者使用或实验室部署。
• 验证控制：确认控制 BI 增长并排除 BI 处理错误或过期指标。
• 根本原因分析：检查循环打印输出、蒸汽质量、空气泄漏、装载实践、包装和室维护。
• 重新鉴定：执行 Bowie-Dick（如果适用），使用最坏情况负载重复 BI 测试，并在发布前验证参数。
• 记录：记录调查、纠正措施以及审核和持续改进的结果。

将 BI 与其他监控工具集成

孢子测试是多模式保证计划的支柱之一。结合指标可以加强检测并防止漏报。

• 物理监测器：来自灭菌器图表/打印输出或数据记录器的温度、压力和暴露时间记录。
• 化学指示剂：外部（包装暴露）和内部 4-5 级积分器，用于确认包装和负载水平参数。
• Bowie-Dick 测试：预真空灭菌器的日常空气排除和蒸汽渗透检查。
• 过程挑战设备 (PCD)：模拟最坏情况条件以实现一致 BI 放置的标准化组件。

文档、可追溯性和审计准备情况

可靠的文档支持合规性和快速调查。电子系统简化了负载、指示器和维护事件的可追溯性。

• 记录保存：周期参数、BI 批次/有效期、放置、培养箱 ID、读出时间和最终解释。
• 链接：将 BI 结果与特定负载、托盘、患者病例（医疗保健）或实验批次（实验室）相关联。
• 保留：按照政策和监管时间表保存记录；存档 COA 和维护日志。
• 审查：定期内部审计和 BI 结果趋势分析，以发现重复出现的问题并改进 SOP。

员工能力和培训要求

有能力的员工确保可靠的结果。培训应将理论与实践和能力评估相结合。

• 方向：蒸汽灭菌原理、BI 科学和标准参考（AAMI ST79、ISO 11138）。
• 技术：正确的 BI 处理、放置、孵化和解释，包括控件的使用。
• 故障排除：识别循环异常、湿包、漏气和记录最佳实践。
• 能力：通过观察 BI 运行和记录审查进行初始和定期评估。

环境和设备注意事项

灭菌器性能取决于腔室设计、蒸汽质量和实用稳定性。环境因素可以直接影响 BI 结果。

• 蒸汽质量：适当的干度和不凝性气体限制；避免过热并确保充分排除空气。
• 装载包装：避免超载；使用经过验证的包装、刚性容器和适当的蒸汽渗透间距。
• 维护：常规垫圈检查、真空系统性能、排水过滤器和传感器校准。
• 公用设施：稳定的供水、排水和压缩空气（如果适用），以防止循环变化。

快速参考：要求一览

下表概括了医疗保健和实验室环境中繁忙团队的核心要求。

医疗保健和实验室团队的实用技巧

一致性和对细节的关注带来可靠的结果。当异常发生时，以下做法可以减少变化并加快解决速度。

• 标准化常见负载的 BI 放置图；在 SOP 中包含照片。
• 按灭菌器、循环类型和负载配置对 BI 结果进行趋势分析，以识别模式。
• 使用快速读取的 BI 最大限度地缩短患者关键仪器的保留时间，同时保持严谨性。
• 使用 PCD 定期进行室挑战测试，以验证空气去除效果。
• 将维护计划与 BI 测试窗口保持一致，以加快服务后的验证。

要点

孢子测试是蒸汽灭菌功效的明确证明。建立基于风险的时间表，选择可追溯的指标，将 BI 放置在最坏情况的位置，仔细记录，并对故障采取果断行动。综合监测和训练有素的工作人员确保医疗保健和实验室环境保持可靠的无菌保证。